India Opal Buloni
India Opal Buloni es el protagonista de la historia de diez años. Vive con su padre, a quien se refiere como «el Predicador». Viven en un parque de casas rodantes en una pequeña ciudad. Su madre los dejó a los dos cuando Opal tenía tres años, y Opal todavía añora a su madre después de todos estos años. Ella ansiosamente busca cualquier conocimiento sobre su madre que pueda aprender y nunca deja de esperar que algún día se reencuentren. Esto es indicativo de la naturaleza amorosa y optimista de Opal. En su nueva ciudad, una solitaria Opal está ansiosa por acoger a un perro callejero al que llama Winn-Dixie. Con Winn-Dixie a su lado, la amigable Opal forma rápidamente relaciones con diferentes personajes de toda la ciudad. Su inocencia y honestidad simple atraen a quienes la rodean. Tiene un corazón amable y generoso y es fácil de amar. Opal es una joven trabajadora y perseverante que no rehuye las responsabilidades, cualidades que se demuestran en la forma en que maneja a su nueva mascota y asume un trabajo. Es respetuosa y madura para su edad y por eso puede relacionarse bien con personas mucho mayores que ella.
Winn-Dixie
Winn-Dixie es el perro que el protagonista de la historia toma después de un encuentro casual en una tienda de comestibles. Lleva el nombre de la tienda de comestibles en la que lo encontraron. Winn-Dixie es una criatura amable y amistosa que ayuda a Opal a entablar amistad con una variedad de personas. Winn-Dixie es una amiga leal y una compañera constante de Opal. Le encanta la mantequilla de maní, la música, las historias y sonríe mostrando todos sus dientes. Encuentra la manera de conectarse con todo tipo de personas: aprecia la música de Otis, las historias de la Sra. Franny y los sándwiches de Gloria Dump.
Opal se refiere a su padre como Predicador en todo Por Winn-Dixie, y debido a esto, el lector nunca aprende su nombre real. El predicador es un hombre definido por su profesión. En un pasaje, Opal compara a su padre con una tortuga que mantiene la cabeza en su caparazón. Cuando la madre de Opal lo dejó, le rompió el corazón y nunca se recuperó. Sufre en silencio y se entrega a su trabajo, lo que lo convierte en un buen hombre y un buen predicador, pero no en un padre ideal para Opal. Opal tiene una relación complicada con su padre, pero la nueva presencia de Winn-Dixie en su casa le permite abrirse y ver qué le estaba haciendo la distancia a su hija.
Gloria Dump
Gloria Dump es una anciana que se convierte en una de las amigas más cercanas de Opal y Winn-Dixie. Vive en una casa antigua y espeluznante rodeada de una vegetación espesa y descuidada. Debido a la apariencia de su hogar, surgió en la ciudad un mito sobre ella como una bruja, creído en particular por los niños del vecindario. Con la ayuda de Winn-Dixie, Opal descubre que en realidad es una dama amable con un sentido del humor autocrítico. Gloria llena parte del vacío que dejó la madre de Opal escuchando todas las historias de Opal y ofreciendo sabios consejos. Gloria le enseña a Opal lecciones importantes sobre la aceptación, la vida y el amor. Ella anima a Opal a aceptar los errores que comete y le enseña que las decisiones que uno toma después los errores son los que los definen.
Señorita Franny Block
La señorita Franny Block es la bibliotecaria de la ciudad y propietaria de la biblioteca de la ciudad. La señorita Franny es una mujer solitaria que no ha creado nuevos recuerdos, sino que se ha pasado la vida acumulando recuerdos antiguos. Cuando Winn-Dixie entra en su biblioteca, ella piensa que es un oso, y esto desencadena un recuerdo traumático que tiene sobre una vez que un oso entró en la biblioteca. La historia de ese encuentro es la primera de muchas que comparte con Opal y Winn-Dixie, quienes se convierten en clientes habituales de la biblioteca. La señorita Franny le enseña a Opal muchas lecciones diferentes a través de sus historias, como cuando le enseña a Opal el concepto de melancolía a través de una historia sobre su bisabuelo.
Otis
Otis es un tímido y tranquilo gerente de una tienda de mascotas. Contrata a Opal en su tienda cuando Winn-Dixie ruega por una oportunidad para que Opal trabaje, donde a Winn-Dixie se le puede soltar la correa y el collar. Otis le enseña a Opal que las personas no siempre son lo que parecen ser. Otis se guarda para sí mismo y evita la presencia de humanos debido a la ansiedad social. Lidia con su fobia social tocando música, pero esto ha contribuido a una mala reputación en la ciudad. Opal y Winn-Dixie ayudan a Otis a superar su miedo a la interacción humana y a superar su ansiedad.
Sweetie Pie Thomas
Sweetie Pie Thomas es una niña que se hace amiga de Opal y Winn-Dixie. Sweetie Pie es extrovertida. Ella está llena de entusiasmo y amor. Debido a que es una de las primeras amigas que hace Opal en la ciudad, le da mucha felicidad a un Opal solitario. Ella es un personaje inocente y tolerante.
Dunlap y Stevie Dewberry
Dunlap y Stevie Dewberry son hermanos de diez y nueve años, respectivamente. Al principio del libro, los hermanos Dewberry son retratados como matones groseros, y a Opal no le gustan. Pero cuando Opal se abre más tarde con ellos, se entera de que solo querían ser amigos de ella. Aunque son inmaduros, en última instancia son niños inofensivos y amigables.
Amanda
Amanda es una lugareña a quien Opal describe como una persona con la cara pellizcada. Opal piensa que Amanda es engreída y grosera, y no le agrada Amanda. Opal finalmente se entera de que el hermano menor de Amanda, Carson, había muerto el año anterior. Opal se da cuenta de que Amanda ha estado afligida, y su rostro contraído era un reflejo de cómo se sentía por dentro. El duro exterior de Amanda ocultaba el profundo dolor y la tristeza que tenía en su interior.
